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簡體中文液相色譜柱的驗收，維護(hù)和保養(yǎng)
分析儀器是藥物的研發(fā)、臨床試驗到質(zhì)量控制的重要工具和手段，液相色譜分析是眾多儀器分析方法中的重中之重。液相色譜柱在色譜分析系統(tǒng)中主要起著核心分離作用，如同色譜系統(tǒng)的心臟，同時也是易損耗品。為了減少損耗，液相色譜柱的驗收,維護(hù)和保養(yǎng)是每個色譜分析實驗室必須建立的管理制度，同時也是從業(yè)人員需要積累和修煉的基本技能。
本文主要針對液相色譜柱使用過程常用問題進(jìn)行探討。
色譜柱的連接
色譜柱安裝應(yīng)按照同一個方向連接使用，且需要按照色譜柱上的方向指示連接，盡量避免色譜柱反向連接！
? 安裝色譜柱時管線伸出接頭長度過長，使得螺紋擰入較淺，會導(dǎo)致密封性不好而漏液，進(jìn)一步引起基線漂移或響應(yīng)降低；
? 安裝色譜柱時管線伸出接頭長度過短，會在管線前段出現(xiàn)死體積，引起峰形展寬，靈敏度降低。
※ 理想的接頭連接應(yīng)具備以下特性：
? 管線與接口之間無死體積；
? 在超高壓和高溫下始終避免泄漏；
? 優(yōu)異的長期使用穩(wěn)定性，防止管線滑動；
? 簡便易用。
選擇合適的接頭?
※ 管線的選擇:
分析型液相系統(tǒng)最常用的規(guī)格是0.12和0.17mm內(nèi)徑的管線。更換管線時首先要確認(rèn)當(dāng)前管線的規(guī)格、并更換相同內(nèi)徑和長度的管線，否則會造成更換前后結(jié)果的不一致，因為管線體積會影響系統(tǒng)柱外體積，從而影響峰形和保留時間。
反相柱活化平衡
首先，使用甲醇或乙腈沖洗約20 倍柱體積 。
柱體積計算?
若流動相含有緩沖鹽，使用與流動相中初始比例相等比例的超純水和有機(jī)相沖洗過渡約20 倍柱體積，再用含緩沖鹽的流動相平衡沖洗約20 倍柱體積或以上。
若流動相不含緩沖鹽，可直接用流動相平衡色譜柱，大約20 倍柱體積或以上。
當(dāng)基線和壓力平穩(wěn)后測試，判斷是否充分平衡以連續(xù)進(jìn)樣結(jié)果的重現(xiàn)為準(zhǔn)。若不夠可延長流動相的平衡時間。
反相柱沖洗保存
使用50:50 甲醇或乙腈與水的混合溶液沖洗20-30 倍的柱體積；
使用純甲醇或乙腈沖洗20-30倍柱體積；
儲存之前將堵頭緊緊密封在柱端接頭上，以免填料變干。
反相色譜柱清洗再生
色譜柱在使用過程中因為樣品或者流動相帶來物理顆?；蛘呋瘜W(xué)吸附，引起色譜柱的污染，這時會在色譜圖上有明顯的變化。出現(xiàn)色譜柱污染時，清洗或反沖清洗則需要根據(jù)色譜柱的特性進(jìn)行操作。清洗或反沖清洗反相色譜柱時，用以下溶劑至少各30倍柱體積沖洗。
例如：柱污染導(dǎo)致的峰分叉
斷開色譜柱與檢測器的連接，將管線留在色譜柱末端，將其放入接收液體的燒杯中，先用不含緩沖液鹽的流動相沖洗（水/有機(jī)相），然后用 100% 有機(jī)相（甲醇和乙腈）沖洗，檢查壓力是否回歸正常，如果沒有，再進(jìn)行下一步操作。如壓力沒有回歸正常，丟棄色譜柱或考慮用更強(qiáng)的條件清洗：75% 乙腈/25% 異丙醇、100% 異丙醇、100% 二氯甲烷 、100% 己烷。值得注意的是，無論是使用己烷還是二氯甲烷，使用之前或恢復(fù)使用反相流動相之前必須用異丙醇進(jìn)行沖洗。
雖然色譜柱不應(yīng)輕易反沖，但當(dāng)明確知道超壓來自顆粒物堵塞篩板或柱頭污染時，反沖是最有效補(bǔ)救方法。反沖色譜柱可使顆粒物快速被沖出，此外還可快速沖出柱頭強(qiáng)吸附污染物，柱子反沖后最好仍然正向連接使用。不過，反沖也會帶來負(fù)面影響，如可能導(dǎo)致柱床松動、發(fā)生保留時間改變、小粒徑的色譜柱反沖可能導(dǎo)致填料流出等。
? 可以反沖的色譜柱有：粒徑大于2um的色譜柱（2.7、3、3.5、4、5μm等）；
? 不可反沖的色譜柱有：粒徑小于2um的色譜柱（1.8μm RRHD/RRHT；1.9μm Poroshell）。
液相色譜柱使用過程中最常見的問題包括pH值、溫度、溶劑耐受、壓力、樣品等。色譜柱使用條件不得超出廠家建議的范圍，包括最高壓力，pH范圍，水相耐受，柱溫等。當(dāng)測試條件接近色譜柱使用范圍的極限值時，柱壽命會受影響。
超范圍使用C18柱，拖尾-永久破壞
根據(jù)pH選擇合適的色譜柱（以Poroshell 120系列為例)
色譜柱是有生命周期的色譜分析關(guān)鍵耗材。為了保障色譜柱的正確使用，提高每一根色譜柱的產(chǎn)出，實驗室需要給每根色譜柱建立檔案，對其從購入到每次使用情況進(jìn)行真實的記錄，保障規(guī)范使用，同時為質(zhì)量管理體系建設(shè)提供原始的資料。
色譜柱的檔案的記錄要點和參考表格如下，實驗室可以根據(jù)項目特點進(jìn)行優(yōu)化：
信息來源：以上內(nèi)容來源于安捷倫技術(shù)報告整理而成
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